ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay), direct ELISA, indirect ELISA, Sandwich test是什麼?

這個ELISA聽說step 1 會結合其他觀念考, 所以一定要很清楚 

簡單講就是測到底檢體(例如體液/血液)裡面有沒有特定的antigen或antibody, 測的方法分成direct ELISA, indirect ELISA, Sandwich test

1.direct ELISA

(1)先加入病人檢體, 假如病人檢體裡面有antigen, 就會黏在plate上 (其他沒有antigen的地方, 也有放blocking物質預防跟後續東西結合,避免不必要亂結合→偽陽性)

(2)加入antibody (enzyme linked antibody)

如果要看到 antigen A, 就需要antibody A 先去跟他結合, 才看得到

然後antibody上面有link一個enzyme, 之後就能偵測這個enzyme, 進而偵測到antibody,代表有antigen

那這個antibody就叫做enzyme linked antibody

那我們是怎麼偵測這個enzyme有作用的呢? 

是看enzyme有沒有作用

所以會在溶液中加入 colorless substrate, 如果enzyme有作用, 就可以把colorless substrate變成colorful product

假如有變色, 代表enzyme有作用, 而偵測到antibody,代表有antigen

(3)下一步是wash, 把沒有 bind在antigen的antibody (unbound antibody)wash掉

所以只剩下 有bind 在antigen B的antibody B, 留在plate

(4)加入 colorless substrate

那我們antibody B (已經結合在antigen B上), 就可以把colorless substrate變成colorful product

假如有變色, 代表enzyme有作用, 有antibody跟antigen存在

2.indirect ELISA

(1)先加入病人檢體, 假如病人檢體裡面有antigen, 就會黏在plate上 (其他沒有antigen的地方, 也有放blocking物質預防跟後續東西結合,避免不必要亂結合→偽陽性)

(2)再加入primary antibody (沒有enzyme linked) 假如 病人的檢體裡面有antigen, antigen就會跟加入的primary antibody結合

(3)再加入針對primary antibody, 把這個primary antibody當成antigen的 secondary antibody (這次就是enzyme-link,又稱為detector antibody), 然後測試有enzyme存在, 然後從enzyme把其他substrate變色, 我們可以知道enzyme有作用, 有secondary antibody 存在, 所以有 原來的primary antibody跟antigen存在)

但是好處是, 因為我們加入了secondary antibody, 可以結合 原來的antibody 的不同epitope(他覺得是antigen),所以發出的 變色可能更亮,  所以indirect ELISA跟direct ELISA比起來, 增加sensitivity

3.Sandwich test

假如想要更專一性的測到某antigen, 增加specificity,預防假陽性, 要用sandwich法

(1)先預先在plate pre-coating 某antibody(這叫 capture antibody) 

(2)加入病人檢體, 假設加入的病人檢體有某 antigen, 那某 antigen就可以bind 在 plate上的某antibody 

(3)然後我們再加入一個可以辨認 某antigen 的另一個 enzyme-link antibody,又稱為detector antibody然後測試有enzyme存在, 然後從enzyme把其他substrate變色, 我們可以知道enzyme有作用, 有antigen存在)

這等於是用雙重的antibody,來驗證這個 antigen, 所以專一性更加強,比較不會辨認錯其他某個epitope相同, 但是其實本質不同的東西, 所以偽陽性減少,變成more specific

這個叫sandwich法, 因為 中間 夾的是病人的antigen, 然後外面跟裡面都有 antibody夾住他, 像夾三明治中的肉, 外面各是兩片麵包

那因為我們加入的enzyme-link antibody, 是直接跟 antigen結合,所以這個是direct sandwich test

(另外有indirect sandwich test, 就同時有sensitivity跟specificity)

參考影片: 

(1)很久,但是真的有清楚: Dr. Najeeb Lectures

https://www.youtube.com/watch?v=4OnLRa7uxuM&t=2968s

(2)簡短版

https://www.youtube.com/watch?v=nNjlBCnpGZ4&t=176s