一、概念: CRISPR/Cas9是原核生物的免疫機制,目的是讓細菌受過嗜菌體(Bacteriophage,感染細菌的病毒)感染之後,下一次在遇到同樣的嗜菌體, 就可以快速殺掉 要達到這個目的, 就要先擷取嗜菌體的基因片段,放進自己的基因資料庫,下次遇到同樣的嗜菌體, 經比對基因片段, 就快速殺掉他 二、詳細機制: 1.現在有一隻嗜菌體感染細菌, 細菌把嗜菌體的基因片段放進自己基因資料庫的紀錄裏面(稱為crispr序列),希望下次遇到同一隻,可以快速殺掉同樣的嗜菌體 2.細菌康復 3.細菌又遇到一隻嗜菌體感染,細菌搜尋自己的基因資料庫(crispr序列), 有沒有遇過同樣的嗜菌體, bingo, 有ㄝ! 4.所以細菌把自己的crispr序列 DNA transcript轉錄成RNA, (過程省略)反正做出crRNA跟tracrRNA的結合體(稱為RNA結合體好了),包含那隻嗜菌體的基因序列 (所以是可以跟嗜菌體的基因序列互補結合的) 5.要開始殺嗜菌體了! RNA結合體過去辯認嗜菌體的基因片段,可以對的上!然後就把Cas9召喚過來(Cas9實際結合的是基因片段旁邊叫PAM的片段,不重要) 6.Cas9 是什麼?是個DNA endonuclease, 可以切DNA nucleotides, 製造DNA斷端(雙股,強調雙股是因為,後面講到人體,單股跟雙股斷裂,DNA repair的方式會不一樣) 7.所以Cas9就把嗜菌體的基因切斷了!嗜菌體死掉!成功消滅病毒 三、應用到真核生物包含人類的細胞,有一些修改, 1.細菌有cas9,人類沒有,所以要送進人類細胞,送的方式很多,主要是把Cas 9跟 RNA結合體一起送進人類細胞 (RNA結合體在細菌是crRNA跟tracrRNA, 到人類就直接變成一個叫guide RNA(gRNA)) 2.送進人類細胞的Cas 9跟 gRNA 會尋找人類細胞的基因序列有沒有可以配對的,有的話, Cas9就把那段基因切斷 3.現在製造出了人類基因的雙股斷端, 人類本來就有2種修復雙股斷端的機制,一種叫NHEJ,另一種叫HEJ: (1) nonhomologous end joining (NHEJ): 直接把折斷的兩根接起來,中間失去的序列不管她,所以會跟原本不一樣(不同源,所以叫nonhomologous) 這樣對人類
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